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    [技术]受激发射损耗(STED)显微镜原理 [复制链接]

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    离线infotek
    科学家
     
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    只看楼主 倒序阅读 楼主  发表于: 03-17
    摘要 D- c4EV  
    M{@(G5  
     Z r8*et  
                                                                           f 2.HF@  
    受激发射损耗(STED)显微镜描述了一种常用的技术，以实现在生物应用的超分辨率。在这种方法中，两束激光—一束正常，一束转变成甜甜圈模式—被叠加到荧光样品上。通过使用荧光过程的发射和损耗以及利用由此产生的饱和效应，与通常的显微镜技术(例如，宽视场显微镜)相比，后反射光显示出更高的分辨率。在本文档中，介绍了这种设备的基本设置。为了模拟饱和效应，在焦点区域采用等效孔径。 3<!7>]A  
    2HdC |$_+  
    任务说明                                                                           G2D$aSh  
    QY/w  
     WY/}1X9.%  
     &HW9Jn  
    多重光源                                                                           fl(wV.Je|  
       uYN`:b8  
    Q?vlfZR`8  
     Wc#24:OKe3  
    螺旋相位板                                                                           ~a:  
    D^O@'zP=At  
     l-Z4Mq6*L  
    %Zi} MPx  
    探测器插件                                                                           +rd+0 `}C  
    29Ki uP  
     0;k# *#w  
    cr3^6HB  
    参数运行 3u=g6W2 F  
    KPF1cJ2N  
                                                                                 !a`&O-ye  
    ,F|f. 7;  
    为了实现焦点区域的z-扫描，可以执行参数运行。使用此工具，用户可以轻松改变整个光学系统的单个参数或一组参数。有关详细信息，请参阅： 3S{ />1Y  
    RP"kC4~1  
    Usage of the Parameter Run Document ueudRb  
                                                                                     ;TYBx24vD'  
    非时序建模 Cy e.gsCT  
    C]6O!Pb0  
                                                                               1#x0q:6  
    ]G\}k  
    将通道配置模式切换设置为Manual Configuration后，用户可以为系统中的每个表面指定为模拟打开哪些通道。运行模拟时，将对活动光路进行初步分析（通过所谓的Light Path Finder）。然后引擎将沿着这些光路将场追踪到系统中存在的探测器。 @]j1:PN-  
    { FkF  
    Channel Setting for Non-Sequential Tracing p{_ " bB  
                                                                                     ;pAK_>  
    总结 – 组件…           'DR!9De  
    _)8s'MjA:&  
                                                                     ax`o>_)  
    ?4,T}@P  
    #"!<W0  
     Nb\4 /;#  
    系统观感 K1KreYlF  
    LVGe]lD  
                                                                         l#o ~W`  
    1Mzmg[L8  
    7#XzrT]  
    发射&损耗激光 6Mf0`K  
    1zv'.uu.,  
                                                                                 e ,(mR+a8  
    dPlV>IM$z  
    光在焦点区域中的传播表明，来自损耗激光的光会产生环形光斑，其中中心孔径小于发射激光的焦斑。由于两个光束在目标上的荧光过程中竞争，这导致信号激光的有效光束尺寸更小。 @JMiO^  
    3fj4%P"  
                                                                                     M3\AY30L  
    3D STED 轮廓 !L(^(;$Kgr  
    u 9e@a9c  
                   [0!(xp^  
                                                             3og.y+.=U.  
    注意：由于这个简化的例子不包括实际的荧光效应，我们为了可视化目的对两个激光束进行了归一化。 us-L]S+lm  
    t.<i:#rj>l  
    受激发射损耗效应                                                                           X ?O[r3<  
    .v K-LHs  
    为了近似饱和损耗的影响，我们在焦点位置对发射激光的结果应用了孔径效应。孔径的参数大致基于损耗激光的焦点轮廓（600nm 直径，25% 边缘）。通过系统传播回探测器平面表明，由于这个过程，光斑变得非常小。 /uc>@!F  
    I7onX,U+  
    {: /}NpA$  
     ?,z}%p  
    VirtualLab Fusion 技术                                                                           { 6il`>=C  
    M`_0C38  
     2y4bwi  
                                                                                     O.? JmE  
     
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