[原创]流式细胞仪(思路较完整版) [复制链接]

已经公开的项目就干脆完成掉....补充一些PPT里没有的东西 71AR)6<R  
em^|E73  
本来打算贴在PPT后面更,发现有下载的后面的跟贴根本和没法一样,干脆另起一贴.     原贴内除PPT外跟贴项目内容删除... D`nW9i7  
Ri$wt.b  
只管工程项目本身的大体,不在意具体结构的细化,所以不会是最完美的结果. UjmBLXz@T  
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更新较慢, 6S-1Wc4  
临时填加,内容难免前后有个别信息重复, IR*g>q  
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niejl@jinlioptics.com 1WGcv O)<  
杭州瑾丽光电 EJ
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首先来看细胞本身。。。 G~Xh4*#J  
（转自百度图片） 9>qc1z  
我们需要检测一些指标，以便半定量化或定量化地在一定程度上区分细胞类别，区分细胞是否癌变等。 ;Qpp`  
以平行激光照射，细胞性状一定，细胞质折射率一定的情况下，其透射散射角就是基本固定的，而散射多少能量完全取决于细胞大小。 [m*=Q  
由于细胞壁和内核各种物质与周围体液，细胞质折射率不同，平行入射光会被个别位置全发射，在90度方向可以测到部分这种全反射光，当多次测量各种位置的细胞时，可视作均匀放射，可以半定量化地比较出一些细胞核内细微物质的区别。 8'=8!V  
细胞是否癌变，或细胞之间存在一些区别时，可以选择对特定物质标记的荧光剂，通过激发观测其是否被标定，浓度等等来判断是否有这种特定物质，含量多少来区分细胞之间的区别。。

然后是测量细胞特征的基本原理 3zJbb3e  
@kR/=EfS  
结构包括2大块： O=o
s ,'"  
1.细胞的导流聚焦模块（细胞可在较细的位于透明稳定的石英材料中央的通道流动，可以通过水动力或声波聚焦技术使细胞排成一列并且保持在轴中央顺序前进） 'jp nQcwxx  
2.激发及采集模块: @:$zReS2  
激发光源在垂直方向照射导流腔内顺序通过的细胞，当细胞通过时，光束通过细胞时产生了前向角散射B和侧向角散射A。如果细胞被荧光标记物标记，同时产生向4PI空间放射的荧光。 0mB]*<x8  
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7~!  
前向角散射散射光的强度与细胞的大小有关，对同种细胞群体随着细胞截面积的增大而增大；对球形活细胞经实验表明在小立体角范围内基本上和截面积大小成线性关系；对于形状复杂具有取向性的细胞则可能差异很大，尤其需要注意。侧向散射光的测量主要用来获取有关细胞内部精细结构的颗粒性质的有关信息。侧向散射光虽然也与细胞的形状和大小有关，但它对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感，也能对细胞质内较大颗粒给出灵敏反映。（此段转自百度百科） !:Lb^C;/  
HR'r~ #j  
细胞被荧光标记物标记后可被某固定波长光源激发产生特定波长荧光，这些荧光的强弱代表细胞膜表面抗原的强度，细胞内或核内物质的浓度。

为达到准确测量的目的，需要了解测量过程的环境，影响因素及可使用材料的情况： <Sn5ME<*  
1.可能被用于标记的荧光，光谱都较宽没有锐线，准确可知，可校验。无需分辨率很高的分析装置。 CFJ F}aW  
kq6K<e4jO  
2.细胞存在自发荧光。 ARYqX\-e  
3.荧光强度与激发光强度相关。 oD,f5Ci-  
4.由于荧光代表核内物质浓度，而细胞内物质位置不固定，所以其空间放射是不均匀的，又由于细胞质与体液虽有折射率差但不会很大，所以虽不均匀不会有过大的突变和大的量差异，这个只能通过实验获得数据。 B 95}_q  
5.荧光本身很微弱。 Fy-+? ~  
6.由于聚焦技术，细胞在导流腔内一定是延中心轴附近排列移动的，但测量时细胞在Z轴的位置是不固定的。 aK'`
yuN  
V.;,1%  
7.测量细胞大小认为是大多数的<100um。

1-7的条件未必完善 =LJc8@<:f  
并且1-7条件内的个别内容虽然明确,但部分准确特性应该通过实验获得.. }fw;{&s{z  
这里为纯粹思路只根据逻辑关系推测...

很有意思的题目，我也来抛个小砖头 |E!()j=  

cyan:很有意思的题目，我也来抛个小砖头[表情] [表情] [表情] j2lo~J)  
[图片] (2016-09-29 13:58) '*!R gbj;  

Nv*x^y]  
集中在中间那条线的时候小细胞不大会受影响的 rfYu8-  
大细胞在100或者100UM以上方形腔肯定会有干扰 r\vB-nJ  
所以那导流腔真的该是直径200um或者300um的柱形才合适...不然不只荧光影响,散射更受影响啊... B P
"PUl:  
不过猜测实际恐怕也和当初提的方形腔要求不同,  不然水动力聚焦效果就大打折扣了.... lf0/0KH  
P~_CDh.N  
PTA;a0A  

内孔常用200*200um，方形的，一般叫流动室，Gem或Jap的质量较好

measure123:内孔常用200*200um，方形的，一般叫流动室，Gem或Jap的质量较好 (2016-09-30 05:06)  a:zx&DwM  

pal))e!B  
方形是受加工工艺所限么还是?

高手在公司 w-B\AK?}