当紫外光照射某一物质时,该物质会在极短的时间内,发射出较照射波长为长的光。而当紫外光停止照射时,这种光也随之很快消失,这种光称为荧光。荧光是一种光致发光现象。如前所述,分子吸收了某一波长区的辐射能后,它的电子可跃迁至激发态,然后以热能形式将这一部分能量释放出来,本身又恢复到基态。如果吸收辐射能后处于电子激发态的分子以发射辐射的方式释放这一部分能量,即为光至发光。再发射的波长与分子所吸收的波长可以相同,也可以不同。物质所吸收光的波长和发射的荧光波长与物质分子结构有密切关系。同一种分子结构的物质,用同一波长的激发光照射,可发射相同波长的荧光,但其所发射的荧光强度随着该物质浓度的增大而增强。利用这些性质对物质进行定性和定量分析的方法,称为荧光光谱分析法,也称为荧光分光光度法。这种方法具较高的选择性及灵敏度,试样量少,操作简单,且能提供比较多的物理参数,现已成为生化分析和研究的常用手段。 xq)/ QR
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1. 荧光的产生及其与分子结构的关系: Sp )}
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1) 荧光的产生: qR<DQTO<
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当光进入某种物质后,可以有两种情况:一种是进入物质后,能量几乎不被吸收;另一种是能量被全部或部分吸收。在后一种情况下,在吸收光的过程中,光能被转移给分子。根据量子理论,分子从光波中吸收能量是不连续的、整份单位的形式发生,这些不连续的微小能量单位被称为光量子。这也就是说,频率n的单色光的能量必定是hn的整数倍。每个光量子的能量 ;E"mB4/)
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E=hn=hc/λ=hcω, N9PM.nbd%
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这里,h为普朗克常数,6.63×10-34J/s;ω为波长,即1cm长度中电磁波的数目。从公式可见,能量E与λ成反比。 7EO&:b